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      Elisa操作:ELISA實驗步驟及注意事項
      更新時間:2023-10-10瀏覽:235次

        Elisa操作:ELISA實驗步驟及注意事項


        Elisa試劑盒技術指出ELISA實驗步驟及實驗需注意的事項:

        1、固相載體選擇

        聚苯乙烯:具有較強的吸附蛋白質的性能,抗體或抗原吸附其上后仍保留原來的免疫學活性。

        聚氯乙烯:聚氯乙烯對蛋白質的吸附性能比聚苯乙烯高,但空白值也略高溫物。

        良好的ELISA板應該是吸附性能好,空白值低,孔底透明度高,各板之間、同一板各孔之間性能相近。

        2、包被

       ?、侔蹇椎倪x擇:ELISA配套的微孔板。

       ?、诳贵w選擇:何針選擇支持ELISA實驗的抗體,根據推薦濃度稀釋或摸索最適濃度。

       ?、郯痪彌_液:pH9.6碳酸鹽緩沖液或pH7.2磷酸鹽緩沖液。

       ?、馨粶囟龋?-8 ℃過夜包被或室溫(37℃)包被2h。

       ?、莅粷舛龋喊粷舛入S載體和包被物的性質可有很大的變化。一般包被濃度為10ug/ml-20ug/ml。


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        3、封閉

       ?、侔恢笠欢ㄒ⒓捶忾](封閉非特異性抗體)。

       ?、谶x擇效果較好的封閉劑(細胞培養級BSA、Tween等)。

        4、加樣及孵育

       ?、偌訕訒r應將所加物加在ELISA板孔的底部,避免加在孔壁上部,并注意不可濺出,不可產生氣泡。

       ?、诜跤臅r間及溫度參考試劑盒說明書。如有條件,建議加樣孵育時使用shaker震蕩儀,推薦軌道直徑3mm,轉速在500±50rpm。

       ?、蹤z測抗體、酶標物的稀釋比例、孵育溫度、孵育時間嚴格根據說明書提示。

       ?、芟窗鍖τ贓LISA來說,是極其關鍵的一步,保證ELISA的特異性。

       ?、?strong>封板膜一定要一次一換,切勿二次甚至多次使用,以防交叉污染。

        5、顯色和終材暗總止

       ?、偈褂们靶铏z查,底物在加入96孔板之前應為無色透明。

       ?、陲@色底物需現配現用,避免污染。

       ?、鄯跤龝r間,說明書上為參考范圍,具體需要根據實驗條件自行摸索??蓞⒖紭饲鷿舛瓤椎念伾?,變為藍色較明顯時即可。

        ELISA試劑盒  BUNSEN本生 公司在經營中始終秉承:遵紀守法,嚴于律己,寬仁以待,敢于承擔的企業精神作為標準,以過硬的質量和優良的服務來維護和拓展市場,較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏,是我們的發展目標。本生!您信任的合作伙伴。我們愿與您真誠合作,共創美好的未來。

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