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      產品快訊:過氧化物酶(POD)活性檢測試劑盒
      更新時間:2023-11-13瀏覽:73次

        產品快訊:過氧化物酶(POD)活性檢測試劑盒


        規格:50T/48S

        注意:正式測定之前選擇2-3 個預期差異大的樣本做預測定。

        產品內容:

        提取液:液體 60mL×1 瓶,4℃保存;

        試劑一:液體 60mL×1 瓶,4℃保存;

        試劑二:液體 0.33mL×2 瓶,4℃保存;用時每瓶加入5mL 試劑一;用不完的試劑4℃保存一周;

        試劑三:液體 10 mL×1 瓶,4℃保存。

        產品說明:

        POD(EC 1.11.1.7)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中,可催化過氧化氫氧化酚類和胺類化合物,具有消除過氧化氫和酚類、胺類毒性的雙重作用。POD 催化 H2O2 氧化特定底物, 在470nm有特征光吸收。

        需自備的儀器和用品:

        可見分光光度計、臺式離心機、可調式移液器、1mL 玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水

        過氧化物酶(POD)活性檢測試劑盒操作步驟:

        一、粗酶液提?。?/p>

        1、 細菌、細胞或組織樣品的制備:

        細菌或培養細胞:先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照細菌或細胞數量(104 個):提取液體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議500萬細菌或細胞加入1mL 提取液),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率 20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復 30 次);8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。

        組織:按照組織質量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入

        1mL 提取液),進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。

        2、 血清(漿)樣品:直接檢測。二、測定步驟:

        1、分光光度計預熱30min 以上,調節波長至470nm,蒸餾水調零。

        2、測定前將試劑一、二和三 37℃(哺乳動物)或 25℃(其它物種)放置10min。

        3、樣本測定表

        試劑名稱(µL)測定管

        樣本15

        蒸餾水270

        試劑一520

        試劑二130

        試劑三135

        在1mL玻璃比色皿中按順序加入上述試劑,立即混勻并計時,記錄470nm下30s 時的吸光值

        A1和1min30s后的吸光值A2。計算ΔA=A2-A1。

        注意:

        a.若一次性測定樣本較多,可將試劑一、二、三和蒸餾水按比例配成混合液,在 37℃(哺乳動物) 或 25℃(其它物種)放置10min 以上,測定時加入15µL 樣本和1055µL 混合液測定。

        b.如果ΔA 小于0.005,可將反應時間延長到5min。如果ΔA 大于0.5,可將樣本用提取液稀釋后測定,計算公式中乘以相應稀釋倍數。

        三、POD 活性計算:

        1、 血清(漿)POD 活性

        單位定義:每mL血清(漿)在每mL 反應體系中每分鐘A470 變化0.01 為一個酶活力單位。計算公式:POD(U/mL)=ΔA×V 反總÷V 樣÷0.01÷T =7133×ΔA

        2、 組織、細菌或細胞 POD 活性

        (1)按樣本蛋白濃度計算

        單位定義:每mg組織蛋白在每mL反應體系中每分鐘A470變化0.01為一個酶活力單位。

        POD(U/mg prot)=ΔA×V反總÷(V樣×Cpr)÷0.01÷T =7133×ΔA÷Cpr

        (2)按樣本鮮重計算

        單位定義:每g組織在每mL反應體系中每分鐘A470變化0.01為一個酶活力單位。

        POD(U/g鮮重)=ΔA×V反總÷(W×V樣÷V樣總)÷0.01÷T =7133×ΔA÷W

        (3)按細菌或細胞數量計算

        單位定義:每1萬個細菌或細胞在每mL反應體系中每分鐘 A470 變化0.01為一個酶活力單位。

        POD(U/104 cell)=ΔA×V反總÷(500×V樣÷V 樣總)÷0.01÷T=14.27×ΔA

        V反總:反應體系總體積,1.07mL;V樣:加入樣本體積,0.015mL;V樣總:加入提取液體積,1mL;T:反應時間,1min;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL;W:樣本鮮重,g;500:細菌或細胞總數,500萬。

        過氧化物酶試劑盒本生一直視質量控制為企業的生命,追求企業競爭力的不斷提升。公司在經營中始終秉承:遵紀守法,嚴于律己,寬仁以待,敢于承擔的企業精神作為標準,以過硬的質量和優良的服務來維護和拓展市場,較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏,是我們的發展目標。本生!您信任的合作伙伴。我們愿與您真誠合作,共創美好的未來。

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